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過表達慢病毒構建

簡要描述:慢病毒(Lentivirus)載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發展起來的病毒載體。對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。在體外實驗及體內實驗的研究中,慢病毒己經成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一, 并且正在獲得越來越廣泛的應用。

  • 更新時間:2024-10-26 00:00:00
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詳細介紹

實驗流程:

利用限制性內切酶消化獲得線性化載體。PCR 擴增制備目的基因片段。所用擴增引物在設計時需在其5'端添加同源重組序列(圖中以綠色和藍色標記),使用該引物擴增目的基因片段,擴增產物5'和3'最末端的序列分別與線性化克隆載體兩末端序列完全一致。以線性化載體和目的基因擴增產物配制反應體系,進行重組反應,實現線性化載體和目的基因片段的體外環化。重組產物直接進行轉化,挑取平板上的單克隆進行PCR鑒定,對陽性克隆進行測序及結果分析。將正確克隆菌液打大培養、抽提,獲得高純度質粒,用于后續實驗。
 

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