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動物：BALB/c或C57BL/6小鼠（8-10周齡，雄性更佳）
病原體：銅綠假單胞菌PAO1或臨床分離株（OD600=0.6時約1×10^8 CFU/mL）
設備：
定制銅質燙傷儀（直徑1cm，重量30g）或可控溫熱水循環系統
紅外測溫儀、無菌活檢穿孔器
耗材：無菌透明敷料（Tegaderm?）、苦味劑（防舔舐）
麻醉與備皮：
異fu烷麻醉，背部剃毛，脫毛膏處理殘留毛發。
碘伏+75%酒精消毒皮膚3次。
標準化燙傷：
干熱法：預熱的銅棒（100℃）接觸皮膚10秒（Ⅲ度燒傷，需病理確認全層皮膚壞死）。
熱水法：90℃水浴中背部皮膚接觸8-10秒（需固定小鼠體位）。
創面確認：
蒼白無出血、無痛覺反應提示全層燒傷。
立即腹腔注射生理鹽水1mL（預防休克）。
菌液制備：
離心收集對數期細菌，PBS調整至5×10^6 CFU/50μL。
接種方法：
用移液器將50μL菌液均勻滴加至燙傷創面。
覆蓋透明敷料（模擬濕潤環境，促進生物膜形成）。
術后管理：
單籠飼養，每日更換敷料，觀察創面滲出/壞死。
| 參數 | 推薦范圍 | 調整依據 |
|---|---|---|
| 燙傷溫度 | 90-100℃ | <80℃難以形成全層燒傷，>120℃導致碳化 |
| 接觸時間 | 8-12秒 | 與皮膚厚度相關（C57BL/6需更長） |
| 細菌劑量 | 1×10^6-10^7 CFU/創面 | 過高導致全身感染，過低難以定植 |
| 感染周期 | 3-7天（急性） / 14天（慢性） | 銅綠假單胞菌生物膜3天后成熟 |
| 指標 | 評分標準 |
|---|---|
| 紅腫 | 0=無，1=邊緣紅腫，2=擴展至周圍組織 |
| 化膿 | 0=無，1=少量滲出，2=大量膿性分泌物 |
| 壞死 | 0=無，1=部分焦痂發黑，2=全創面壞死 |
細菌載量：
剪取創面組織（含周圍5mm正常組織）。
勻漿后梯度稀釋，接種LB平板計數CFU/g組織。
組織病理：
HE染色：中性粒細胞浸潤、組織壞死深度。
Gram染色：觀察細菌分布。
生物膜檢測：
掃描電鏡或共聚焦顯微鏡（SYTO9/PI染色）。
體重下降（>20%需人道終點）。
血液CFU計數（判斷是否發生敗血癥）。
燙傷均一性控制：
使用固定壓力燙傷儀（如50g/cm2壓力）。
同一實驗員操作以減少變異性。
感染劑量驗證：
預實驗檢測不同劑量下72h創面CFU（理想范圍1×10^5-10^6 CFU/g）。
鎮痛管理：
術后布tuo啡諾（1mg/kg SC q12h）減輕疼痛。
糖尿病模型適配：
db/db小鼠燙傷后感染率更高，但需延長愈合觀察期。
混合感染模型：
聯合接種金黃色葡tao球菌（1×10^5 CFU）和銅綠假單胞菌（1×10^6 CFU）模擬臨床復雜感染。
免疫抑制處理：
環lin酰胺（150mg/kg IP）預處理增強感染易感性。
生物膜強化：
延遲抗生素治療至接種后48h，促進生物膜形成。
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